为何CT值每差3.3，病毒载量可能差10倍呢？

常橙

病毒载量对于蓝耳病、圆环病毒2型及非洲猪瘟等感染过程分析中是非常关键的指标。随着qPCR（定量PCR）技术的普及应用，我们可以通过检测结果的CT值来间接的知道原反应体系中模板数量。

通常，CT值越低，则反应模板量越高，也说明说检测病毒粒子的数量越多，危害越大。对于断奶仔猪而言，若野毒PRRSV的CT值越低，通常断奶后的死亡率越高。对于圆环病毒也如此，育肥猪的CT值越低，造成的临床损失也越大。

那CT值与病载量之间到底什么关系，是正相关还是有什么线性关系吗？为何有人说：CT值每差3.3，病毒载量可能差10倍呢？

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什么是CT值呢？
循环阈值（Cycle Threshold，Ct），是指荧光定量PCR实验中荧光信号首次超过背景噪音水平时的循环次数，可用于计算扩增前模板中目标基因的拷贝数等。那么Ct值与模板量、产物量之间的关系是什么样的呢？
扩增产物量Xn=起始模板量X0×（1+扩增效率En）循环个数n

我们可以看出，Ct值与起始模板的对数存在线性关系，当扩增产物量为定值时，起始模板量越大，需要的循环数越少，Ct值越小；起始模板量越小，需要的循环数越多，Ct值越大。

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与酶的扩增效率En与qPCR反应体系的敏感性

理论上，假设初始模板量为1 copies/μL，酶的扩增效率100%，到达最大阈值约需要35个循环，因此业内通常认为qPCR的有效线性范围为Ct:15-35。

通常酶的扩增效率无法达到100%，初始模板为1 copies/μL，到达最大阈值的循环数可能会达到38或更高，当酶的效率更低或者存在抑制剂时，检测到1拷贝模板的循环数的Ct值可能会更高。

当初始模板的核酸浓度低于或等于1 copies/μL时，影响因素不仅仅在于是否能够检测到模板，还与每次成功获取模板的概率有关。在很低浓度情况下，每次获取模板的概率遵循泊松分布，此时可能导致检测结果的不稳定或假阴性。

根据上述公式，我们可知，在同样的初值模板浓度下，反应体系中的酶的扩增效率越高，CT值越低，也说明：qPCR体系的敏感性越高。

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CT值和稀释倍数的关系

根据“2△CT=初值模板浓度差”公式可知：

模板每稀释2倍，则CT值增加1；模板每稀释4倍，则CT值增加2；模板每稀释8倍，则CT值增加3；模板每稀释10倍，则CT值增加3.3个；这是理论计算，与实际还是有偏差的。

也就是说：CT值每相差3.3，病毒载量/初值基因模板约差别10倍。比如：即一个模板的CT值是20，稀释2倍后的CT值在21个左右；稀释4倍后的CT值在22个左右；稀释8倍后的CT值在23个左右；稀释10倍后的CT值在23.3个左右。

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总结

qPCR作为定量PCR不单可以对感染的阳性与阴性做定性判断，而且可以对模板量进行定量。根据qPCR提示的样品中病毒载量高低，可以明确环境中病毒的污染程度，栋舍的洗消质量，可以明确消毒剂对病毒核酸的裂解能力，也可以推断猪体内的病毒载量，从而推断疾病可能造成的经济损失与临床危害性等。

记住：CT值每差3.3，样品中的病毒含量差10倍，若CT值差6.6，那么病毒含量就差100倍，而CT值差9.9的话，病毒载量将相差1000倍。

文章参考 “你的DNA在动哎”公众号

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