红平 发表于 11-11 20:25

我是临床兽医师,但不是PCR兽医!



各位养猪产业链同行们,大家好!

今天某同行拿着某种病原的PCR检测结果,来咨询该病例的临床诊断。让我想跟大家聊聊PCR应用与临床诊断的关系。

分子生物学技术的发展,尤其是PCR,qPCR技术的广泛应用,让兽医诊断变得快捷且精准。尤其是非洲猪瘟之后,几乎所有的中大型猪场在其周围50km范围内都配置了分子生物学诊断实验室。这使得PCR技术在猪病诊断中的应用越来越广泛。

01、PCR技术的主要应用点

PCR/qPCR诊断的基本原理是:通过特异性基因片段的扩增富集,来判断是否存在某种特异性的病原。也就是说:PCR检测是通过检测特异性基因片段的存在来推断是否存在某种病原及病原的相对含量。

在临床上,PCR技术主要有两个关键性应用:

➤ 生物安全风险评估

通过对进入猪场物资、车辆、人员等样品检测非洲猪瘟、蓝耳病及PEDV等病原,在一定程度上,可以提示猪场所面临的生物安全风险,并强化猪场对上述物资与人员洗消过程的控制。PCR技术作为某些重大疾病的风险提示及风险漏洞的排查等工具,作用显著,居功至伟。

➤ 疾病辅助诊断

在某些重大疾病诊断过程中,PCR的作用非常大。比如:蓝耳病、非洲猪瘟、PEDV、猪瘟、伪狂犬等。若检测到猪群存在上述重大疾病野毒的基因片段,就可提示猪群存在上述疾病暴发或经济损失的可能性,再结合猪群的临床表现,若发现猪群表现出与该种疾病相对应的临床症状,那么基本可对上述几种重大疾病做确诊。



02、PCR检测的过度依赖及导致的后果

但在临床实践中,某些兽医存在过度PCR检测技术的苗头,几乎在所有的传染性疾病的诊断中,都会使用PCR诊断技术,且将PCR检测结果作为诊断的关键性证据,这可能是非常错误的。

因为PCR检测到某些病原的基因的存在,并不一定代表该病原是主要的致病因。

微生物在动物机体运行过程中起到非常重要的作用,主要微生物包括病毒、细菌、寄生虫等。在身体的某些部位,尤其是肠道、呼吸道内存活着成千上万的微生物,而绝大部分的微生物都是有益的,或与动物是共生关系。仅有小部分的微生物是致病的,而致病性也有强弱之分。

根据《猪病学》,猪体内存在潜在致病性的病原有200种左右,这些具有潜在致病性的病原,绝大部分都是条件性致病源,也就是说:只有在某些条件下,这些病原才能造成经济损失。

比如:绝大部分猪群体内都携带有圆环2型/3型病毒、大肠杆菌、沙门氏菌、胞内劳森氏菌,甚至细小病毒(育肥猪群)、链球菌、副猪嗜血杆菌、附红细胞体、弓形体等。若仅是通过PCR检测,超过60%,甚至90%的猪群上述病原的PCR检测结果都是阳性的,但并不能简单地说:上述病原都在致病,且造成一定的经济损失。

03、临床兽医的思考维度

临床猪兽医的主要功能是维持优化或维持猪群的高健康状态。作为临床兽医,无论你擅长于治疗、预防、还是技术管理,都有用武之地。只是随着猪群规模的扩大,越来越重视疾病的预防,而非是治疗。

随着养猪产业对成本竞争的加剧,财务与数字化管理的应用之后,养猪产业越来越重视经济性指标,兽医需要通过各种疾病的经济性影响,梳理出工作的主要矛盾点,并给予优先顺序。

对于兽医而言,某些病原,甚至是某些潜在较大危害的病原(比如:链球菌、传染性胸膜肺炎等)存在于猪群并不可怕,重要的是要控制住这些条件性致病菌的致病因素。比如:若蓝耳病、圆环病毒2型等控制得当,猪链球菌的危害就可以控制在一定范围内。

真正的临床兽医,需要将复杂的临床问题简单化,需要梳理出导致临床危害或经济损失的关键性病因或诱发性因素,抓住“牛鼻子”,而非“舍本逐末”,甚至“惊慌失措”。

04、总   结

分子生物技术,尤其是PCR技术在某些重大疾病诊断与控制中起到关键性作用,比如:蓝耳病、非洲猪瘟等。但在某些疾病控制中,需要谨慎性使用,比如:圆环病毒或回肠炎等。‍‍

全基因组测序成本越来越低,对于新发病诊断有重大作用。目前通过一次NGS(下一代测序技术),可以知道你的猪群存在很多种病原,这只是第一步,下一步是:到底哪一种病原在本次疾病暴发或经济损失中起到关键性作用,这就需要临床兽医进行分析应用。

PCR技术极大方便与帮助了临床兽医。但临床兽医诊断是综合性的,需要根据临床症状,病理变化、分子生物学与血清学、病原学等多种手段的辅助,才能做出正确、可靠的诊断!

记住:我们是临床兽医,不是PCR兽医。临床兽医需要在复杂的现场中,找到主要矛盾点,并解决问题,而PCR只能告诉我们存在什么基因片段。




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